Кинетические параметрыСтраница 4
в) серия разведений стандартной ДНК должна охватывать весь диапазон возможных концентраций субстрата в экспериментальной ДНК.
Если достаточно определить лишь относительную концентрацию субстрата, для построения калибровочного графика удобно использовать серию разведений одного из экспериментальных образцов. В тех случаях, когда образцы могут сильно отличаться по примесям и доле амплифицируемого фрагмента в реакционной смеси, имеет смысл при наладке эксперимента приготовить серию разведений каждого из них и сравнить эффективности.
В тех случаях, когда требуется оценить "абсолютное" количество субстрата, выбор стандартов для градуировочного графика представляет собой более сложную задачу, поскольку с одной стороны, необходимо знать точное число. Для определения количества матрицы в RT-PCR предложены следующие варианты стандартов:
1. очищенный RT-PCR-продукт;
2. рекомбинантная ДНК;
3. рекомбинантная РНК с последующей обратной транскрипцией;
4. синтетический олигонуклеотид, содержащий амплифицируемую последовательность.
При использовании очищенных препаратов в реакцию всегда необходимо добавлять неспецифические ДНК, чтобы приблизить условия реакции к экспериментальным. Для RT-PCR это могут быть, например, обратные транскрипты бактериальной РНК, polyA-РНК, тРНК или рРНК. Однако насколько бы условия реакции со стандартными образцами не были приближены к экспериментальным, "абсолютное" определение по-прежнему остается расчётом относительно стандарта.
Антигенные свойства фагов
Известно, что при введении в организм животного подкожно или внутривенно белка, бактериальных клеток, некоторых продуктов жизнедеятельности микроорганизмов и других веществ в крови животного вырабатываются вещества, названные антителами. Вещества, способные вызывать образование антител, называются антигенами.
Антитела очень специфичны ...
Размеры и форма колоний
Важные признаки колоний — их размеры и форма. Колонии могут быть большими или мелкими. Величина колоний — признак, позволяющий различать различные виды, роды и даже типы бактерий.
В большинстве случаев колонии грамположительных бактерий мельче колоний грамотрицательных бактерий. Колонии бактерий могут быть плоскими, приподнят ...
Биология маньчжурского зайца
Систематическое положение маньчжурского зайца.
С.И. Огнев (1940) выделял маньчжурского зайца в отдельный род Allolagus. К этому же роду он относил, обитающего в Японии. А.А. Гуреев (1964) объединил маньчжурского зайца с brachyurus в один вид и включил его в род Caprolagus, представители которого (12 видов) обитают в Азии (от Афганистан ...