Кинетические параметры
Страница 4

в) серия разведений стандартной ДНК должна охватывать весь диапазон возможных концентраций субстрата в экспериментальной ДНК.

Если достаточно определить лишь относительную концентрацию субстрата, для построения калибровочного графика удобно использовать серию разведений одного из экспериментальных образцов. В тех случаях, когда образцы могут сильно отличаться по примесям и доле амплифицируемого фрагмента в реакционной смеси, имеет смысл при наладке эксперимента приготовить серию разведений каждого из них и сравнить эффективности.

В тех случаях, когда требуется оценить "абсолютное" количество субстрата, выбор стандартов для градуировочного графика представляет собой более сложную задачу, поскольку с одной стороны, необходимо знать точное число. Для определения количества матрицы в RT-PCR предложены следующие варианты стандартов:

1. очищенный RT-PCR-продукт;

2. рекомбинантная ДНК;

3. рекомбинантная РНК с последующей обратной транскрипцией;

4. синтетический олигонуклеотид, содержащий амплифицируемую последовательность.

При использовании очищенных препаратов в реакцию всегда необходимо добавлять неспецифические ДНК, чтобы приблизить условия реакции к экспериментальным. Для RT-PCR это могут быть, например, обратные транскрипты бактериальной РНК, polyA-РНК, тРНК или рРНК. Однако насколько бы условия реакции со стандартными образцами не были приближены к экспериментальным, "абсолютное" определение по-прежнему остается расчётом относительно стандарта.

Страницы: 1 2 3 4 


Экологические факторы, влияющие на распространение
С точки зрения экологии, белка является обычным, на большей части распространения немногочисленным видом. Численность растет к северу и на восток ареала, к Шимановскому и Мазановскому району соответственно. Плотность по территории составляет 3,5 зверька на 1000 га, при этом в полосе южных лесов, которые ближе всего к населенным пунктам ...

Экономическая оценка вклада природных экосистем в глобальную биосферную устойчивость
В 21 век международное сообщество вошло со всем грузом экологических проблем 20 века. Эти проблемы тем более сложны, поскольку их надо решать одновременно со сглаживанием неравенства экономического развития стран и их экономической интеграцией. В мире растет стремление направить развитие на эффективное совмещение производства экономичес ...

Промеры сердца маньчжурского зайца
Сердце – конусовидный мышечный орган, расположенный в грудной полости в средостении на уровне 3 – 6-го ребра, несколько сдвинуто влево. Широкое основание сердца направлено вверх. С ним связаны крупные сосуды, подходящие и отходящие от сердца. Сердце является основным органом кровообращения. Передняя стенка сердца более выпуклая, чем зад ...