BioNow

в) серия разведений стандартной ДНК должна охватывать весь диапазон возможных концентраций субстрата в экспериментальной ДНК.

Если достаточно определить лишь относительную концентрацию субстрата, для построения калибровочного графика удобно использовать серию разведений одного из экспериментальных образцов. В тех случаях, когда образцы могут сильно отличаться по примесям и доле амплифицируемого фрагмента в реакционной смеси, имеет смысл при наладке эксперимента приготовить серию разведений каждого из них и сравнить эффективности.

В тех случаях, когда требуется оценить "абсолютное" количество субстрата, выбор стандартов для градуировочного графика представляет собой более сложную задачу, поскольку с одной стороны, необходимо знать точное число. Для определения количества матрицы в RT-PCR предложены следующие варианты стандартов:

1. очищенный RT-PCR-продукт;

2. рекомбинантная ДНК;

3. рекомбинантная РНК с последующей обратной транскрипцией;

4. синтетический олигонуклеотид, содержащий амплифицируемую последовательность.

При использовании очищенных препаратов в реакцию всегда необходимо добавлять неспецифические ДНК, чтобы приблизить условия реакции к экспериментальным. Для RT-PCR это могут быть, например, обратные транскрипты бактериальной РНК, polyA-РНК, тРНК или рРНК. Однако насколько бы условия реакции со стандартными образцами не были приближены к экспериментальным, "абсолютное" определение по-прежнему остается расчётом относительно стандарта.

Акклиматизация
Акклиматизация - это форма физиологической адаптации, которая позволяет животному изменить свою толерантность к факторам среды. Обычно термин акклимация применяют к экспериментам, в которых адаптация происходит по отношению к одному фактору, например к температуре. Термин акклиматизация обозначает комплекс адаптивных процессов, протекаю ...

Вопросы антропогенеза в современной антропологии.
Систему современных наук можно уподобить некоторому спектру, в котором присутствуют моменты дискретности и непрерывности. Именно поэтому при введении той или иной жесткой классификации сразу же выявляются пограничные науки. Если естествознание противопоставляется гуманитаристике, то интересующая нас антропология (от греч. Antropos – чел ...

Управление половыми циклами у европейской ряпушки различными методами
При промышленном рыборазведении большое значение имеют правильное планирование и организация работ по поддержанию и увеличению численности той или иной популяции рыб с учетом ее исторически сложившейся структуры, что является важным приспособительным свойством вида в лучшем использовании нагульного и нерестового ареала. В связи с этим п ...