Кинетические параметры
Страница 4

в) серия разведений стандартной ДНК должна охватывать весь диапазон возможных концентраций субстрата в экспериментальной ДНК.

Если достаточно определить лишь относительную концентрацию субстрата, для построения калибровочного графика удобно использовать серию разведений одного из экспериментальных образцов. В тех случаях, когда образцы могут сильно отличаться по примесям и доле амплифицируемого фрагмента в реакционной смеси, имеет смысл при наладке эксперимента приготовить серию разведений каждого из них и сравнить эффективности.

В тех случаях, когда требуется оценить "абсолютное" количество субстрата, выбор стандартов для градуировочного графика представляет собой более сложную задачу, поскольку с одной стороны, необходимо знать точное число. Для определения количества матрицы в RT-PCR предложены следующие варианты стандартов:

1. очищенный RT-PCR-продукт;

2. рекомбинантная ДНК;

3. рекомбинантная РНК с последующей обратной транскрипцией;

4. синтетический олигонуклеотид, содержащий амплифицируемую последовательность.

При использовании очищенных препаратов в реакцию всегда необходимо добавлять неспецифические ДНК, чтобы приблизить условия реакции к экспериментальным. Для RT-PCR это могут быть, например, обратные транскрипты бактериальной РНК, polyA-РНК, тРНК или рРНК. Однако насколько бы условия реакции со стандартными образцами не были приближены к экспериментальным, "абсолютное" определение по-прежнему остается расчётом относительно стандарта.

Страницы: 1 2 3 4 


Основные терапевтические эффекты Церебролизина при лечении различных патологиях ЦНС. Церебролизин и деменциальные расстройства различной этиологии
Современная неврология понимает под сосудистой деменцией гетерогенное по основным клиническим, морфологическим и биохимическим характеристикам состояние, которое включает нарушения лимбических, паралимбических, диэнцефальных и фронтальных зон мозга и приводит к нарушениям мнестической и других когнитивных сфер, включая речь, ориентировк ...

Питание кролика
Вы счастливы: в вашем доме появился новый, пушистый и очаровательный питомец! Его хочется все время брать на руки, гладить, прижимать к животу и чесать вокруг ушек. Это естественное желание, и не надо себе отказывать в его исполнении. Однако, в перерывах между тисканьем кролика (а делать это надо, на самом деле очень осторожно и не слиш ...

Материал. Методика сбора
Материалом для написания данной работы послужили пробы, собранные у п. Половинка Томского района. В период летней практики было поставлено три опыта на определение продукции фитопланктона, взято 12 проб для определения содержания пигментов в воде и 18 проб на видовое разнообразие фитопланктона. Качественные пробы объемом 0,5л брали 2 р ...