Кинетические параметры
Страница 4

в) серия разведений стандартной ДНК должна охватывать весь диапазон возможных концентраций субстрата в экспериментальной ДНК.

Если достаточно определить лишь относительную концентрацию субстрата, для построения калибровочного графика удобно использовать серию разведений одного из экспериментальных образцов. В тех случаях, когда образцы могут сильно отличаться по примесям и доле амплифицируемого фрагмента в реакционной смеси, имеет смысл при наладке эксперимента приготовить серию разведений каждого из них и сравнить эффективности.

В тех случаях, когда требуется оценить "абсолютное" количество субстрата, выбор стандартов для градуировочного графика представляет собой более сложную задачу, поскольку с одной стороны, необходимо знать точное число. Для определения количества матрицы в RT-PCR предложены следующие варианты стандартов:

1. очищенный RT-PCR-продукт;

2. рекомбинантная ДНК;

3. рекомбинантная РНК с последующей обратной транскрипцией;

4. синтетический олигонуклеотид, содержащий амплифицируемую последовательность.

При использовании очищенных препаратов в реакцию всегда необходимо добавлять неспецифические ДНК, чтобы приблизить условия реакции к экспериментальным. Для RT-PCR это могут быть, например, обратные транскрипты бактериальной РНК, polyA-РНК, тРНК или рРНК. Однако насколько бы условия реакции со стандартными образцами не были приближены к экспериментальным, "абсолютное" определение по-прежнему остается расчётом относительно стандарта.

Страницы: 1 2 3 4 


Предложите гипотезу о причинах возникновения в ходе эволюции лишайников
Одной из гипотез о причинах возникновения лишайников в процессе эволюции может быть гипотеза о постепенном переходе от паразитизма к симбиозу. Основной компонент лишайников - гриб - формирует гаустории, которыми гриб внедряется в клетки водоросли и поглощает их содержимое. Вероятно, на первом этапе возникновения лишайников такой паразит ...

Распространённость аномалий в популяциях с/х животных и профилактика их распространения
В норме распространение аномалий – 1%. Распространитель летальных и полулетальных генов – производитель. Аномалии у к.р.с.: 1. Укорочение нижней челюсти – аутосомный рецессивный. 2. Отсутствие носовых отверстий – аутосомный рецессивный. 3. Пупочная грыжа – или аутосомный рецессивный, или доминантный. Относительная частота отдельных типо ...

Тестостерон
Тестостерон является основным мужским половым гормоном (в норме на его долю приходится около 90% от всех секретируемых андрогенов [27]). 90% этого гормона продуцируется семенниками, 5% – корой надпочечников и 5% образуется в результате метаболизма других стероидных гормонов в неэндокринных органах [27]. Тестостерон, как и другие андрог ...